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分泌型表达bFGF文献资料
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构建及鉴定碱性成纤维细胞生长因子重组真核载体pCMV-sbFGF
目的:构建可分泌表达bFGF蛋白的重组真核表达载体,并检测哺乳动物细胞的表达情况,为缺血性脑卒中基因治疗提供新的途径.方法:运用PCR技术将bFGF基因进行扩增,通过重叠PCR技术将FGF-21的信号肽序列(FGF-21-SP)和bFGF基因连接,使用限制性内切酶和T4连接酶将重叠PCR产物FGF-21-SP-bFGF基因导入到pshuttle质粒载体中,再通过转染将重组真核载体转入293T细胞中,通过Western blot技术检测bFGF的表达.结果:成功构建带有分泌型bFGF基因的pshuttle质粒载体,Western blot检测显示在真核细胞293T中成功表达.结论:成功构建可分泌表达bFGF蛋白的重组真核表达载体,在真核细胞中高效表达,为开发可分泌表达bFGF蛋白的重组基因治疗载体奠定实验基础.
