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OX-Lp(a)通过上调miR-125a-5p靶向抑制10,11-转位酶2增加单层血管内皮细胞通透性
目的 探讨ox-Lp(a)损伤血管内皮细胞的表观遗传调控机制.方法 生物信息学分析和筛选与10,11-转位酶2(TET2) mRNA 3’-UTR靶向结合的候选miRNA,荧光素酶报告基因系统验证其结合的靶向性;以0 mg/L、25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L及200 mg/L的ox-Lp(a)与HUVEC-12内皮细胞孵育24 h,或用100 mg/Lox-Lp(a)与HUVEC-12内皮细胞孵育0h、6h、12 h、24 h及48 h,qRT-PCR和Western blot分别检测TET2 mRNA和蛋白的表达水平.qRT-PCR检测hsa-miR-125a-5p表达水平,以5hmc水平分析TET2活性的变化,Transwell检测ox-Lp(a)对单层血管内皮细胞通透性的影响.结果 生物信息学分析和荧光素酶报告基因验证结果表明TET2为hsa-miR-125a-5p的靶基因,且hsa-miR-125a-5p与TET2 mRNA的3’-UTR结合的自由能值低(-30.1 kcal/mol).ox-Lp(a)呈剂量和时间依赖性抑制TET2蛋白和mRNA的表达水平,以100 mg/L ox-Lp(a)作用HUVEC-12内皮细胞24h的效果佳;100 mg/L ox-Lp(a)作用HUVEC-12内皮细胞24h后,TET2活性显著下降,且显著上调hsa-miR-125a-5p的表达.anti-hsa-miR-125a-5p能逆转ox-Lp(a)对HUVEC-12内皮细胞TET2蛋白和mRNA表达水平的抑制作用和活性下降.ox-Lp(a)显著增加单层血管内皮细胞通透性,但可被anti-hsa-miR-125a-5p部分逆转.结论 ox-Lp (a)通过上调hsa-miR-125a-5p并与TET2 mRNA 3’-UTR靶向性结合,抑制TET2蛋白和mRNA的表达水平及活性,从而增加单层血管内皮细胞通透性.
