首页 > 文献资料
-
单核苷酸多态性敏感分子开关在基因组单核苷酸多态性检测中的特异性分析
目的 探讨硫化修饰的碱基特异性引物与高保真DNA聚合酶所构成的对单核苷酸多态性敏感的分子开关系统在基因组单核苷酸多态性检测中的特异性.方法 以人类基因组DNA为模板,采用3'末端配对及不配对的3'末端硫化修饰引物,进行不同保真度DNA聚合酶介导的引物延伸反应.结果 Taq酶介导的碱基特异引物延伸反应扩增产物出现非特异性带,而单核苷酸多态性敏感分子开关介导的引物延伸反应未出现非特异性带.结论 单核苷酸多态性敏感分子开关是一种特异性强,可靠性高的可用于基因组单核苷酸多态性分析的新方法,可在单碱基水平对遗传病相关基因进行特异性检测.
-
SNP敏感性分子开关对神经性耳聋GJB3中C→T突变点的识别
目的利用硫化修饰的碱基特异性引物与高保真DNA聚合酶所构成的对SNP敏感的"开/关"系统识别神经性耳聋GJB3中C→T突变点.方法以非耳聋志愿者染色体DNA为模板,采用配对及三末端不配对的3′硫化修饰引物,使用不同保真度DNA聚合酶进行引物延伸反应.结果该方法仅能使野生型基因相关的引物得以延伸,而耳聋基因相关引物则不能延伸.结论本方法可在单碱基水平对遗传病相关基因进行特异性检测,提示其在单基因遗传病的诊断中具有广阔的应用前景.
-
基因突变敏感性分子开关检测β地中海贫血基因突变
目的:采用高保真DNA聚合酶介导的基因突变敏感性分子开关准确、快速检测β地中海贫血.方法:首先提取正常人血液基因组DNA,根据已知β珠蛋白基因热点突变CD41-42、IVS2-654区域序列,分别设计突变序列扩增引物,利用低保真酶进行引物延伸反应,将其PCR产物克隆到pMD19-T载体,得到β地中海贫血常见的两个突变住点的基因突变克隆:CD41-42、IVS2-654,然后以这两个突变位点为检测靶点,分别设计3'末端与野生型基因住点或突变基因位点配对的引物,硫化磷酸修饰3'末端并偶联高保真DNA聚合酶构成的基因突变敏感性分子开关,对含有相应突变的阳性质粒模板及正常人基因组DNA模板进行引物延伸反应,并通过凝胶成像系统对其进行分析.结果:当引物与模板完全配对时,引物被延伸,有PCR产物:当引物与模板不完全配对时,引物不被延伸,无PCR产物.结论:高保真DNA聚合酶介导的基因突变敏感性分子开关能准确、快速筛查β地中海贫血CD41-42、IVS2-654突变,提示其在单基因遗传病的诊断中具有广阔的应用前景.
-
聚合酶3′外切活性对3′硫化修饰引物聚合反应的影响
目的探讨硫化修饰的次3′末端不配对引物能否引发高保真DNA聚合酶介导的聚合反应的非成熟性终止,即所谓聚合反应的"关"效应.方法采用配对及非末端不配对的3′硫化修饰引物,研究其对不同保真度DNA聚合酶引物延伸反应的影响.结果非末端不配对的3′硫化修饰引物也能引发高保真DNA聚合酶介导的聚合反应非成熟性终止,而对低保真DNA聚合酶所介导的聚合反应则无明显影响.同时,3′硫化修饰的配对引物对不同保真度DNA聚合酶引物延伸反应均无影响.结论硫化修饰的次3′末端不配对引物与3′末端不配对引物对引物延伸的影响相似,同样能引起高保真DNA聚合酶介导的聚合反应的"关"的效应.显然,在单基因遗传病的诊断及单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的高通量分析等方面,硫化修饰的碱基特异性引物与高保真DNA聚合酶所构成的对SNP敏感的"开/关"系统,具有广阔的应用前景.
