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应用COⅠ短序列片段鉴定常见嗜尸性麻蝇
目的:利用线粒体DNA(mtDNA)中278 bp的细胞色素氧化酶辅酶Ⅰ(cytochrome oxidase Ⅰ,CO Ⅰ)序列鉴定我国常见嗜尸性麻蝇,寻求快速、准确的嗜尸性麻蝇种类鉴定方法.方法:从12个省16个地区户外草地家兔尸体上采集麻蝇科3属4种共计19个样本.利用十二烷基硫酸钠-蛋白酶K法提取蝇类胸肌mtDNA; Eppendorf 5331型扩增仪对278 bp的CO Ⅰ基因片段进行PCR扩增；检测扩增产物,PCR胶回收纯化,测序并上传GenBank;利用MEGA4.0软件按邻近法构建无根系统发育树,通过序列分析建立种内及种间进化分歧表.结果:邻近法构建的发育树中4种麻蝇各自聚群,与形态学鉴定结果一致,上述麻蝇按照不同属、种分别聚类,其种内分歧整体均数均小于或等于3％,种间进化分歧均数在8％～12％之间.结论:COⅠ中278 bp基因序列能有效地鉴定常见嗜尸性麻蝇种类,进一步完善我国嗜尸性麻蝇基因库,为今后在实际案例中应用分子标记鉴定嗜尸性麻蝇进而推断死亡时间奠定基础.
关键词： 法医昆虫学 嗜尸性麻蝇 分子鉴定 细胞色素氧化酶辅酶Ⅰ -
利用COI序列序列鉴定常见嗜尸性蝇种
目的 检测嗜尸性蝇类线粒体DNA(mtDNA)细胞色素氧化酶辅酶Ⅰ(COI)中278bp序列,鉴定蝇科3属5种嗜尸性蝇,解决其形态学种类鉴定的难题,为死亡时间推断提供技术支持.方法 从15省、市(地区)室外草地家兔尸体上采集蝇科3属5种共计18个蝇类成蝇样本,提取mtDNA进行PCR扩增,序列测定且上传GENBANK,并使用MEGA软件进行序列比对及进化距离分析,构建不同地区各种内和种间系统发育树,尝试区分常见嗜尸性蝇类.结果 基因序列分析结果显示,上述蝇类mtDNA上COI基因序列的种内进化分歧均数在0％～0.8％,种间进化分歧均数在7.6％～13.4％之间；进化距离分析显示,在种间水平,家蝇和孕幼家蝇、斑趾黑蝇和家蝇、厩螫蝇和厚环黑蝇Bootstrap检验的可信度分别为56％、31％、53％；种内水平除了家蝇和厚环黑蝇外,其他Bootstrap检验可信度均为100％.结论 嗜尸性蝇类mtDNA中COI序列分析能够区分常见嗜尸性蝇类,作为形态学方法的补充手段,实现精确的蝇种鉴定.
关键词： 法医昆虫学 线粒体DNA 细胞色素氧化酶辅酶Ⅰ 嗜尸性蝇类 -
呼和浩特等地区嗜尸性苍蝇mtDNA中COⅠ基因序列检测及法医学应用
目的通过对嗜尸性苍蝇线粒体DNA(mtDNA)上细胞色素氧化酶辅酶Ⅰ(CO Ⅰ)中278bp基因序列的分析,对其成虫及其幼虫、蛹、卵的种属进行鉴定,解决依据形态学方法难以鉴定的难题.方法随机分别采集呼和浩特和甘肃敦煌地区兔和猪尸体上的嗜尸性苍蝇、幼虫、蛹及其腹中的卵,提取其mtDNA,经PCR扩增、产物检测与纯化、测序等,进行序列分析和构建系统发育树.结果双翅目嗜尸性苍蝇的种内基因差异均数小于1%,种间差异均数大于3%,成虫与幼虫、蛹、卵之间无显著性差异.结论mtDNA上CO Ⅰ序列分析均可以有效地对嗜尸性苍蝇及其幼虫、蛹、卵进行种属鉴定,方法快速、简便和精确,可作为法医学嗜尸性苍蝇种属鉴别的可靠方法.
关键词： 嗜尸性苍蝇 种属鉴定 线粒体DNA 细胞色素氧化酶辅酶Ⅰ -
嗜尸性蝇类线粒体DNA分子标记检测的研究进展
嗜尸性蝇类种属鉴定是利用昆虫进行检案的重要一步,常常对案件的侦破起到关键作用.传统上,仅依据其形态学特征来判断嗜尸性蝇类的种属.由于其形态结构复杂和种间形态差异微小等特点,尤其在其幼期很难鉴别其种属.利用线粒体DNA(mtDNA)上细胞色素氧化酶辅酶Ⅰ和Ⅱ(COⅠ和COⅡ)的序列对嗜尸性蝇类进行种属鉴定,是近几年来发展起来的新技术,该检测方法能有效地将嗜尸性蝇类鉴定到属种的水平,目前国内尚无这方面的报道,本文对国外这方面工作的进展作一综述.
关键词： 嗜尸性苍蝇 种属 线粒体DNA 分子标记 细胞色素氧化酶辅酶Ⅰ 细胞色素氧化酶辅酶Ⅱ
