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荧光定量PCR评价铜绿假单胞菌感染的实验研究
目的 探讨FQ-PCR定量检测铜绿假单胞菌oprⅠ基因的方法在快速诊断铜绿假单胞菌败血症,及快速判定抗生素体内疗效中的作用.方法 (1)制备不同浓度的标准菌株并行药敏实验,找出敏感药物(丁胺卡那霉素)及非敏感药(苯唑西林钠).(2)SD大鼠120只随机分为5组,分别取不同浓度的菌液尾静脉注入,于实验开始0 h、12 h、24 h、48 h各组分别麻醉6只大鼠,采血作血培养、FQ-PCR.(3)SD大鼠72只随机分为治疗组、处理组和对照组,均给予1×109 CFU/ml尾静脉注入.随后治疗组立即给予敏感抗生素;处理组立即给予非敏感抗生素;对照组同时给予等量生理盐水,均于尾静脉注入.各组于首次注射后0 h、12 h、24 h、48 h分别麻醉6只大鼠,采血作血培养、FQ-PCR.结果 (1)1×109 CFU/ml、1 ×108 CFU/ml组各时间段血培养均为阳性,FQ-PCR检测,均为阳性.(2)1×107 CFU/ml、1×106 CFU/ml组0 h、12 h血培养均为阳性,1×107 CFU/ml组24 h血培养为阳性,48 h为阴性,而1×106 CFU/ml组24 h、48 h血培养均为阴性.FQ-PCR检测1×107 CFU/ml组0 h、12 h、24 h为阳性,48 h为阴性.1×106 CFU/ml组0 h、1-2 h、为阳性24 h、48 h为阴性.(3)1×105 CFU/ml组各时间段血培养均为阴性,FQ-PCR检测均为阴性.(4)处理后对照组、处理组各时间段血培养均为阳性,而处理后治疗组各时间段血培养均为阴性.FQ-PCR检测三组各时段均为阳性.结论 (1)FQ-PCR诊断铜绿假单胞菌败血症与传统细菌培养比较其特异性吻合率达100%,虽灵敏度并未增加,但诊断时间明显缩短.(2)有效抗生素治疗后,运用FQ-PCR诊断灵敏度明显高于细菌培养.(3)40用FQ-PCR检测铜绿假单胞菌oprⅠ基因的拷贝数的变化可能有助于扰生素体内敏感性的判断.
