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无血清微载体培养文献资料
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无血清微载体培养对永生化人肝细胞增殖及其凝血因子生成的影响
目的 观察无血清微载体培养对永生化人肝细胞(IHH)凝血因子mRNA和蛋白表达的影响,以进一步提高生物人工肝的安全性.方法 实验分为有血清微载体培养IHH组和无血清微载体培养IHH组,分别培养0、5、10、15、20 d后观察两组细胞的增殖情况;应用RT-PCR和Western-blot方法检测两种培养方式对IHH凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ的mRNA和蛋白表达的影响.结果 经0、5、10、15、20 d培养后,镜下两组细胞同时间点细胞密度相似,细胞活力差异无统计学意义(P＞0.05).RT-PCR结果显示两组细胞均能表达FⅠ、FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅧ、FⅨ、FⅩ、FⅪ的mRNA,无血清培养组mRNA表达量相对较高(P＜0.05).Western-blot结果显示两组细胞均可表达以上8种凝血因子蛋白,两组细胞的FⅠ、FⅡ、FⅧ、FⅩ、FⅪ蛋白表达量差异无统计学意义(P＞0.05),无血清培养组FⅤ、FⅦ、FⅨ的蛋白表达量相对增高(P＜0.05).结论 成功建立无血清微载体培养IHH体系,且无血清微载体培养对IHH凝血因子的产生影响不大.
