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华支睾吸虫severin蛋白对肝癌细胞SMMC-7402增殖、迁移及侵袭作用的初步研究
目的 研究华支睾吸虫Severin蛋白对肝癌细胞株SMMC-7402增殖以及侵袭迁移能力的影响.方法 构建Csseverin的慢病毒表达载体,并稳定转染肝癌SMMC-7402细胞.Western blot鉴定得到稳定过表达Csseverin的肝癌细胞系(PEZ-LV203-Csseverin 7402),并通过荧光显微镜观察其细胞内绿色荧光的表达;CCK-8实验检测过表达Csseverin后肝癌细胞SMMC-7402增殖能力的改变;用划痕愈合实验和Transwell小室侵袭实验检测Csseverin对SMMC-7402细胞迁移侵袭能力的影响;RT-PCR检测PEZ-LV203-Csseverin 7402和对照细胞内侵袭相关指标基质金属蛋白酶2 (MMP-2)、MMP-9的mRNA水平.结果 肝癌细胞SMMC-7402稳定过表达Csseverin后,Western blot检测出PEZ-LV203-Csseverin 7402中的Csseverin蛋白明显增多,荧光显微镜观察细胞有明显的绿色荧光表达;CCK-8实验表明Csseverin能明显促进SMMC-7402细胞的增殖能力.细胞划痕实验显示与对照细胞相比,过表达Csseverin的SMMC-7402细胞的迁移能力明显增强.Transwell小室检测显示,过表达Csseverin后的SMMC-7402中穿膜细胞数高于对照细胞组.RT-PCR检测出PEZ-LV203-Cs severin-7402中的MMP-2和MMP-9 mRNA水平明显高于对照细胞组.结论 Csseverin可促进肝癌细胞SMMC-7402的增殖,可能通过上调MMP-2和MMP-9表达从而促进肝癌细胞SMMC-7402的侵袭迁移能力.
