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Sir2同源基因文献资料
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阴道毛滴虫两个Sir2同源基因的克隆和功能
目的 探讨寄生性原虫阴道毛滴虫细胞生长和衰老的相关基因.方法 从阴道毛滴虫的cDNA表达文库中分离出两个与酵母沉寂信息调节因子 (Sir2) 有较高同源性的cDNA克隆,分别命名为TvSir2和TvSir2-like,它们的编码框分别长915 bp和1116 bp.结果 序列分析显示这两个cDNA克隆与酵母Sir2同源性很高,其氨基酸序列中含有Sk2p及其同源蛋白三个特征性保守结构域.分别从这两株cDNA克隆中扩增出表达片段植入表达载体pET-41a,转化宿主菌E.coli BL21并用IPTG(isoprupylthio-β-D-galactoside)诱导表达到大量融合蛋白.用亲和层析法纯化的融合蛋白分别免疫豚鼠,获得的抗血清用Western-blot法识别到滴虫虫体全蛋白中大小为34 000 Mr和42 000 Mr的条带.免疫荧光法检测TvSir2和TvSir2-like蛋白位于细胞核外的内质网和高尔基复合体区域.结论 TvSir2和TvSir2-like克隆是酵酶Sir2的同源基因,为TvSir2和TvSir2-like在模式生物阴道毛滴虫的功能研究奠定了基础.
