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rDNA第2内转录间隔区文献资料
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嗜人按蚊rDNA-ITS2基因的克隆鉴定及SNP分析
目的 克隆和分析嗜人按蚊核糖体DNA(rDNA)第2内转录间隔区(ITS2)序列,研究嗜人按蚊rDNA-ITS2序列的种属特异性及不同个体rDNA-ITS2序列的单核苷酸多态性(Single Nuclear Polymorphism,SNP).方法 用DNA提取试剂盒从嗜人按蚊中提取DNA摸板,利用蚊虫5.8S和28S序列的保守性设计特异引物进行聚合酶链反应以扩增嗜人按蚊rDNA-ITS2基因,扩增产物经回收纯化后连接到TA载体,经amp+LB固体平板筛选的阳性克隆,经amp+LB液体培养基培养后进行PCR鉴定、EcoRI酶切鉴定和序列分析.结果 经PCR反应扩增出全长556 bp的嗜人按蚊rDNA-ITS2基因,纯化后重组克隆经PCR鉴定可重现556 bp的特异性条带,其酶切产物亦与目的基因PCR产物位置相同.嗜人按蚊6个克隆的同一性为99.6%,其rDNA-ITS2基因单核苷酸存在颠换和插入,在556的范围内有一个A→T,一个G→T的颠换;一个T的插入.结论 嗜人按蚊rDNA-ITS2序列在种间高度保守,但不同个体间也存在一定的SNP多态性.
关键词： 嗜人按蚊 rDNA第2内转录间隔区 聚合酶链反应 单核苷酸多态性
