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CMY-39新基因亚型AmpC β-内酰胺酶的特性研究
目的 对弗劳地枸橼酸杆菌所产CMY-39新基因亚型AmpC β-内酰胺酶进行酶特性研究.方法 pET-32a(+)/CMY-39表达质粒在BL21 (DE3)中诱导表达,进行SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定酶蛋白的表达；原菌株和重组表达菌株进行药敏试验,并提取重组表达菌株的CMY-39酶蛋白进行AmpC酶三维试验和酶动力学检测.结果 pET-32a(+)/CMY-39在大肠埃希菌中大量表达,蛋白相对分子质量约为60 000,用特异抗体经Western检测该条带为阳性；AmpC酶三维试验为阳性；CMY型重组菌株药敏试验结果与原菌株相比,对青霉素类和头孢西丁具有明显的水解作用,第三、四代头孢菌素对之较为稳定,动力学结果与酶稳定性结果基本一致.结论 证实重组菌株pET-32a(+)/CMY-39能高效表达CMY-39酶蛋白,表达CMY型重组菌株与原菌株比较,对β-内酰胺类抗生素的敏感性和稳定性有所增加,亲和力下降.
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CTX-M型和CMY型耐药基因的检测与传播机制的探讨
目的 筛查广州医学院第一附属医院临床分离的80株革兰氏阴性杆菌的CTX-M型或CMY型耐药基因,检测含CTX-M型或CMY型菌株的耐药情况以及初步探讨耐药传播机制中质粒介导耐药这一途径.方法 对该细菌进行总DNA的提取,PCR扩增该80株细菌的DNA.结合K-B法药物敏感试验,分析菌株的耐药特征,提取基因筛选为阳性的细菌,判定其质粒是否存在耐药基因,质粒接合试验判断是否为可接合质粒.结果 检出ESBLs产酶菌CTX-M型4株,占5%,AmpC产酶茵CMY型3株,占3.75%.对耐药基因的筛选为阳性的7株菌株质粒提取,有6株菌为阳性,质粒接合试验结果显示有2株菌的质粒为可接合质粒,野生茵和接合茵的质粒中均存在耐药基因.结论 CTX-M和CMY菌株呈现多重性耐药性,CTX-M和CMY菌株的耐药基因大部分位于质粒上,其中2株为可接合质粒,这一初步探讨为耐药传播机制的研究打下基础.
