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人Ⅰ型干扰素受体亚基稳定表达真核细胞的筛选及鉴定
目的:筛选及鉴定人Ⅰ型干扰素受体亚基(IFNAR1)稳定表达真核细胞.方法:体外扩增IFNAR1基因片段,将双酶切后扩增片段和pcDNA3.1(+)连接构建重组质粒pcDNA3.1-IFNAR1,转化BL21感受态细菌培养,提取重组质粒行琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定.重组质粒pcDNA3.1-IFNAR1转染肝癌细胞系HepG2,新霉素筛选挑取阳性克隆细胞,蛋白质印迹试验(Western blotting)分析阳性细胞IFNAR1表达水平.结果:经双酶切和测序验证pcDNA3.1-IFNAR1重组质粒构建成功.pcDNA3.1-IFNAR1转染HepG2经新霉素筛选后获得稳定表达细胞系,蛋白质印迹试验(Westem blotting)证实这些细胞具有较好蛋白表达水平.结论:体外成功构建不同IFNAR1稳定表达水平的HepG2细胞.
关键词： 人Ⅰ型干扰素受体亚基 IFNAR1基因 重组质粒 稳定表达 真核细胞 -
人Ⅰ型干扰素受体亚基表达对IFN-α抑制HBV复制水平的影响
目的 探讨人Ⅰ型干扰素受体亚基(IFNAR1)不同表达水平对IFN-α抑制HBV复制的影响.方法 扩增在前期构建的IFNAR1不同表达水平稳定HepG2细胞(R1/H1、R1/H2、R1/H3株和对照细胞PS1、PGFP细胞),分别以瞬时转染HBV表达质粒pUC 19-1.24HBV和对照质粒,培养24h后加入IFN-α,48h后收集细胞采用Southem blot检测HBVD-NA,荧光定量PCR检测细胞和上清HBVDNA水平.结果 Southern blot检测提示IFN-α干预后HBV复制水平在R1/H1和R1/H2细胞及R1/H3株中IFN-α抑制细胞内核壳颗粒HBVDNA活性显著高于PS1和PGFP细胞;荧光定量PCR结果提示R1/H3细胞中细胞和上清HBVDNA水平较R1/H1、R1/H2细胞系无显著下降.结论 IFNAR1蛋白表达水平不同可能导致IFN-α抑制HBV复制效应的差异.
关键词： 人Ⅰ型干扰素受体亚基 IFNAR1基因 重组质粒 稳定表达细胞
