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干扰素α2a对人结肠癌细胞胸苷磷酸化酶表达和5′-脱氧氟尿苷抗癌活性的影响
目的 探讨干扰素-α2a(IFN-α2a)对人结肠癌细胞胸苷磷酸化酶(TP)mRNA表达水平以及5′-脱氧氟尿苷(5′-DFUR)和氟尿嘧啶(5-FU)抗癌效应的影响.方法 不同剂量IFN-α2a分别处理人结肠癌细胞LOVO和SW480,荧光定量PCR检测TP mRNA表达水平；MTT法检测联合应用IFN-α2a前后5-FU和5′-DFUR对LOVO和SW480抑制作用的半数有效浓度(IC50)变化情况.结果 与0 U/ml IFN-α2a浓度组相比,500 U/ml及5000 U/ml组可明显上调LOVO和SW480细胞TPmRNA表达(P＜0.01),而50 U/ml则对上述两种细胞TPmRNA表达水平无明显影响(P＞0.05).联合应用浓度为20 U/ml的IFN-α2a后,5-FU对LOVO和SW480细胞的IC50无明显改变(P＞0.05),但5′-DFUR的IC50则明显降低(P＜0.05).结论 IFN-α2a能上调结肠癌细胞TP mRNA的表达水平,并可使5′-DFUR对结肠癌细胞的IC50明显下降,而对5-FU则无明显影响.
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单核细胞增强5′-脱氧氟尿苷抗结直肠癌细胞活性
目的探讨巨噬细胞在结直肠癌化疗中的调控作用.方法应用 ELISA法分别检测结直肠癌细胞系 LS174T、 Clone A、 Colo320、 MIP101的胸苷磷酸化酶 (dThdPase)蛋白含量.采用 MTT分析,分别测定出氟尿嘧啶( 5- FU)和 5′-脱氧氟尿苷( 5′- DFUR)对上述 4种癌细胞的半数有效浓度( IC50).然后把 5′- DFUR加入培养基中同人血单核细胞一起培养 24 h,其培养上清液 2倍稀释后加入结直肠癌细胞中行 MTT分析测定其 IC50有无改变.同时测定单核细胞在不同浓度 5′- DFUR中的存活率.结果 4种结直肠癌细胞仅 LS174T检出 0.5 U/mg的 dThdPase蛋白,其它 3种未检出. 4种癌细胞对 5′- DFUR的 IC50均明显高于 5- FU( P< 0.01).同人血单核细胞一起培养后, 5′- DFUR对 4种癌细胞的 IC50明显下降,仅相当于处理前的 11.6%～ 34.3%( P< 0 05),同时发现 5′- DFUR对人血单核细胞无明显生长抑制作用.结论被检结直肠癌细胞因缺乏 dThdPase活性,不能在细胞内转化抗癌药物 5′- DFUR为 5- FU发挥细胞毒作用;同人血单核细胞一起培养后, 5′- DFUR在单核细胞内 dThdPase的催化下,可转化成 5- FU并释放到培养基中发挥抗癌作用.
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5′-脱氧氟尿苷和5-氟尿嘧啶对6株大肠癌细胞的抑制作用
目的:测定大肠癌细胞的胸苷磷酸化酶(dThdPase)蛋白含量,探讨dThdPase与5′-脱氧氟尿苷(5′-DFUR)、5-氟尿嘧啶(5-FU)对大肠癌细胞的生长抑制作用的相互关系.方法:采用ELISA法对6株大肠癌细胞系LS174T、CloneA、Colo320、CX-1、Lovo和MIP101进行dThdPase蛋白定量分析,然后进行5′-DFUR、5-FU对6株大肠癌细胞的生长抑制实验.把大肠癌细胞分别接种于96孔培养板的每孔中培养24 h,分别加入2倍梯度稀释的5′-DFUR和5-FU,继续培养96 h后应用MTT分析分别测定5′-DFUR和5-FU对6株大肠癌细胞的半数有效剂量(IC50).结果:除LS174T检出0.5 u/mg、Lovo检出8.9u/mg的dThdPase蛋白外,其它4株癌细胞未检出.6株大肠癌细胞均对5-FU高度敏感,其半数有效浓度(IC50)分别为1.52～13.68 μmol/L,而5′-DFUR对6株大肠癌细胞的IC50则分别为68.71～528.15 μmol/L,是5-FU的15倍～94倍,差异有显著性(P＜0.01).结论:6株大肠癌细胞很少有dThdPase蛋白表达;每一株大肠癌细胞对5′-DFUR的敏感性均明显低于5-FU.
