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PC-3细胞:短发夹RNA文献资料
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骨桥蛋白shRNA表达载体介导的RNA干扰对前列腺癌PC-3细胞生长和侵袭的影响
背景与目的:骨桥蛋白(osteopontin,OPN)诱导多种恶性肿瘤细胞的浸润和转移与基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2和MMP-9的活化密切相关.本研究旨在探讨OPN在人前列腺癌PC-3细胞的增殖和侵袭过程中的作用以及IκB激酶(Ⅰ kappa B kinase,IKK)在NF-κB介导的信号通道中可能的功能.方法:将OPN短发夹RNA(short-hairpin RNA,shRNA)重组质粒转染PC-3细胞并应用不同浓度的IKK抑制剂分别抑制IKKα和IKKβ的活性,然后采用实时PCR和Westem blot分别检测OPN、MMP-2和MMP-9三种mRNA和蛋白的表达水平,流式细胞术、MTT法和Transwell实验分别检测细胞生长周期变化、细胞增殖和和侵袭能力.结果:与对照组相比,转染重组质粒的细胞中OPN、MMP-2和MMP-9三种蛋白的表达量分别下降了55.22%、51.71%和28.35%(P<0.05),凋亡二倍体数目显著增加,细胞的迁移能力和侵袭能力分别下降了45.48%和51.96%(P<0.05).此外,特异性地抑制IKKβ酶的活性能显著降低MMP-2和MMP.9的表达水平.结论:shRNA表达载体介导的OPN基因沉默能明显抑制PC-3细胞的恶性生物学行为;在OPN诱导MMP-2和MMP-9活化的过程中,IKKB酶的活性可能发挥了重要的作用.
