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SB203580和WP631对照射后肺成纤维细胞内Smad通路信号转导的影响
背景与目的:放射性肺纤维化以成纤维细胞增殖和细胞外基质过度沉积为特征.转化生长因子β1 (transforming growth factor β1,TGFβ1)是放射性肺纤维化发生发展的"开关"性分子并被作为治疗的靶分子,因此阻断TGFβ1的信号转导可能减轻肺纤维化.本研究检测Smad通路抑制剂SB203580和WP631对照射后人肺成纤维细胞(human lung fibroblast, HLF)中信号转导的影响并探讨其效应.方法:将HLF用25μmol/L SB203580和5nmol/L WP631预处理后,再应用3 Gy 60co γ射线照射和10μg/L TGFβ1 刺激,通过凝胶阻滞电泳(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)、免疫印迹、免疫组织化学及细胞周期流式细胞仪检测等方法检测转录因子SP1和AP1活性的变化、Smad3,4,7和p-Smad3 及Ⅰ型胶原和Ⅰ型组织纤溶酶原激活物抑制剂 (typeⅠplasminogen activator inhibitor,PAI-1)的表达变化及细胞周期的变化.结果:经3 Gy γ射线照射及TGFβ1 刺激后,与未经预处理的HLF相比,应用SB203580或WP631预处理的HLF出现G2-M 期阻滞,S期细胞显著减少.SB203580预处理可减少HLF中P21WAF1/CIP1和p-Smad3的表达,而WP631预处理可减少HLF表达PAI-1,抑制转录因子SP1和AP1的活化.结论:SB203580和WP631通过阻断TGFβ-Smad通路的信号转导,抑制γ射线和TGFβ1 作用所导致的HLF过度增殖和P21WAF1/CIP1及PAI-1表达增多.
