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核苷酸切除修复基因XPA反义RNA增强肺癌细胞对顺铂的敏感性
背景与目的:目前认为,肿瘤细胞自身核苷酸切除修复(nucleotide excision repair,NER)能力增强是肿瘤细胞产生耐药性重要的机制之一.着色性干皮病A(xeroderma pigmentosun group A,XPA)基因在核苷酸切除修复早期发挥核心作用.本研究拟探讨XPA基因表达与肺癌细胞株对顺铂敏感性的关系.方法:将XPA的反义RNA稳定转染人肺癌细胞株A549,用有限稀释法筛选阳性细胞克隆.分别用Northern blot和Westem blot法检测阳性细胞克隆XPA mRNA和蛋白水平;MTT法检测肿瘤细胞对顺铂敏感性;宿主细胞再活化反应(host cell reactivation,HCR)检测肿瘤细胞DNA损伤修复能力.结果:筛选得到6个阳性克隆AS1～AS6,其中AS3～AS6细胞克隆的XPA mRNA和蛋白水平均明显降低.剂量依赖实验表明,顺铂对A549细胞与AS1～AS6细胞克隆的半数抑制浓度(IC50)分别为8.1、7.6、4.7、3.2、1.9、2.8、4.1μg/ml.统计学分析表明,与A549细胞相比,AS3～AS6细胞对顺铂的敏感性明显增强(F=9.75、9.14、7.39、8.91,P=0.005、0.006、0.012、0.006),而且XPAmRNA表达水平与细胞IC50值呈显著相关(r=0.927,P=0.003).处理24、48、72 h后,AS3～AS6细胞对顺铂的敏感性同样显著增强.HCR实验结果表明,AS3～AS6细胞的NER能力显著减弱,而且XPA mRNA表达水平与细胞NER能力呈显著相关(r=0.854、0.696、0.858;P=0.014、0.082、0.013).结论:XPA反义RNA转染可明显降低肺癌细胞XPA mRNA水平,减弱细胞NER能力,继而使肺癌细胞对顺铂的敏感性增强.
