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微小RNA-145-5p调控视网膜β-catenin对小鼠眼轴的影响
目的:探讨miR-145-5p调控视网膜β-catenin表达对小鼠眼轴的影响.方法:取18只雄性3周龄C57BL/6小鼠按照随机数字表法随机分成对照组,miR-145-5p mimics组和miR-145-5p对照组.分组第2,5,8天双眼玻璃体腔注射1次药物,共注射3次:对照组小鼠玻璃体腔内注射3μL枸橼酸盐缓冲液,miR-145-5p mimics组小鼠玻璃体腔内注射3μL含有3μg miR-145-5p mimics的枸橼酸盐缓冲液,miR-145-5p对照组采取同样方法注射3μg miR-145-5p对照载体.后一次注射完成3 d后A超测量小鼠眼轴长度,之后取小鼠视网膜组织,采用RT-PCR技术检测视网膜中miR-145-5p和β-catenin的表达,采用Western印迹法检测视网膜组织中β-catenin的含量.取6只成年雄性C57BL/6小鼠,构建β-catenin mRNA 3'UTR荧光素酶过表达载体,将β-catenin mRNA 3'UTR荧光素酶过表达载体与miR-145-5p mimics共同转染小鼠视网膜组织,3 d后取视网膜组织,应用荧光素酶报告基因技术检测和验证miR-145-5p与β-catenin的相关性.结果:视网膜转染miR-145-5p mimics后,小鼠眼轴长度降低,与对照组相比有显著性差异(P<0.05),视网膜组织中miR-145-5p表达上升,β-catenin在mRNA和蛋白水平表达均下降(P<0.05).视网膜转染miR-145-5p对照后,视网膜组织中miR-145-5p表达以及β-catenin的蛋白含量未见明显变化(P>0.05);荧光素酶报告基因结果显示转染miR-145-5p和β-catenin mRNA 3'UTR荧光素酶过表达载体后,视网膜组织中荧光活性显著降低(P<0.001).结论:miR-145-5p能够下调视网膜β-catenin的表达,进而控制眼轴增长.
