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肿瘤坏死因子-α诱导的蛋白-8样分子2促进热损伤小鼠CD4阳性T细胞凋亡
目的：探讨肿瘤坏死因子-α诱导的蛋白-8样分子2（TIPE2）对重度烫伤小鼠模型脾脏CD4+T淋巴细胞的凋亡的影响。方法140只成年雄性BALB/C小鼠分为6组，应用小RNA干扰技术制作siTIPE2/过表达慢病毒，复制小鼠重度烫伤模型。分离BALB/c小鼠脾脏CD4+T细胞，检测各组CD4+T淋巴细胞凋亡，Smad2/Smad3、磷酸（P）-Smad2/P-Smad3以及B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）家族蛋白Bcl-2/Bim的表达。检测各组小鼠CD4+T内线粒体膜电位改变情况及细胞色素C的变化和各组小鼠CD4+T内含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（caspase-3)、（caspase-8)、（caspase-9)的活化情况。结果 siTIPE2-burn组CD4+T淋巴细胞凋亡率为12.33%，较sham组外其余组减少，P-smad2/P-Smad3蛋白表达（灰度值）显著降低（P<0.01）。siTIPE2-burn组Bcl-2的蛋白表达较其余组升高（P<0.05），Bim的表达则降低（P<0.05）。siTIPE2-burn组线粒体膜电位细胞色素C水平均较sham组外其余组降低（P<0.05），caspase-3活性较TIPE2-burn组降低（P<0.01），caspase-8、caspase-9活性较其余组降低（P<0.05）。TIPE2-burn组凋亡率高，TIPE2-burn组Smad2/Smad3蛋白表达较sham组明显升高（P<0.05），P-smad2/P-Smad3蛋白表达较其余组显著升高（P<0.05）；CD4+T内线粒体膜电位较其余组降低（P<0.01），细胞色素C水平升高，caspase-3、caspase-8、caspase-9活性较其他组均升高（P<0.05）。结论 TIPE2作为一种重要的负向调控分子，可通过促进转化生长因子β即TGF-β/Smads信号传导通路、线粒体相关凋亡途径加速T淋巴细胞凋亡。
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肿瘤坏死因子-α诱导蛋白-8样分子2对小鼠调节性T细胞免疫调节功能的影响
目的 观察肿瘤坏死因子-α诱导蛋白-8样分子2(tumor necrosis factor -αinduced protein 8 like -2,TIPE2)在CD4+ CD25+调节性T细胞(CD4+ CD25 +Treg细胞)中的表达,并进一步分析其对CD4+ CD25+ Treg细胞免疫抑制活性的影响. 方法 免疫磁珠法分选正常BALB/c小鼠脾脏CD4+ CD25+ Treg细胞.采用RT - PCR和Western blot技术分别从mRNA和蛋白水平检测CD4+ CD25+ Treg细胞细胞内TIPE2表达.进一步应用小RNA干扰技术(siRNA)沉默TIPE2表达,流式细胞术观察TIPE2对T淋巴细胞毒性相关抗原(CTLA) -4及叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)表达的影响,ELISA法检测CD4+ CD25+ Treg细胞分泌IL - 10和转化生长因子(TGF)-β水平,并通过MTT比色试验观察效应T细胞增殖活性的改变. 结果 RT - PCR分析在CD4+CD25+ Treg细胞中检测到147 bp大小的特异性TIPE2目的基因条带.Western blot检测证实CD4+CD25+ Treg细胞中存在清楚的TIPE2条带,相对分子质量为21 000.siRNA处理CD4+ CD25+ Treg细胞后,经抗CD3/CD28刺激活化的CD4+ CD25+ Treg细胞培养24h时CTLA -4和Foxp3表达明显下降(P＜0.01),同时IL - 10和TGF -β生成量显著减少(P＜0.01)；此外,CD4+ CD25+Treg细胞对CD4+ CD25 -T细胞的抑制功能明显减弱(P＜0.05). 结论 TIPE2作为一种重要的负向调控分子,在CD4+ CD25+ Treg细胞中表达并影响CD4+ CD25+ Treg细胞的免疫抑制功能.
