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DNA型EGS文献资料
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DNA型EGS抑制HCMV UL97基因的表达及病毒复制
目的 研究DNA型外部引导序列对人巨细胞病毒(HCMV)UL97基因的靶向抑制作用及抗病毒作用.方法 借助计算机软件(RNAStructure4.5)模拟HCMV UL97 RNA的结构,选择二级结构相对简单且具备核糖核酸酶P(RNase P)底物一级结构序列特征的位点作为候选切割靶位,针对不同靶位设计并合成的DNA型EGS.将各EGS分别与体外转录的HCMV UL97 RNA及纯化的人RNase P体外混合,初步筛选具备靶向引导切割活性的EGS.进一步将体外有效的EGS转入HCMV感染的人胚肺成纤维细胞(HELF),通过Western与Northern印迹法检测EGS在宿主细胞内对靶基因表达的影响.此外,通过空斑试验测定病毒的生长曲线,测定EGS对病毒复制的影响.结果 本文设计并合成了针对HCMV UL97基因6个不同靶位的DNA型EGS( EGS168、EGS212、EGS313、EGS663、EGS1580和EGS1664).体外切割试验证实,EGS212、EGS313、EGS663和 EGS1580具有明显的靶向引导切割作用.在 HCMV 感染的宿主细胞中, EGS212和EGS1580均能够沉默病毒UL97基因的表达,并显著抑制病毒的复制,分别使病毒滴度降低高达约300倍和600倍.结论 本研究成功获得两种具有抗HCMV潜力的DNA型EGS,为进一步研发新型抗HCMV核酸类药物奠定了基础.
