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人端粒酶逆转录酶启动文献资料
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HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒表达系统的构建与鉴定
目的:构建靶向结肠癌细胞的人端粒酶逆转录酶HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒并对该表达体系进行鉴定.方法:根据GenBank中的HTERT启动子(HTERTp)序列设计引物,以人胚肾293细胞提取基因组DNA为模板,PCR扩增HTERTp,并将HTERTp序列克隆入pDC312质粒中,构建成HTERTp调控的腺病毒质粒pSG-HTERTp; NK4 cDNA酶切并回收克隆至pSG-HTERTp载体中,构建成pSG-HTERTp/pA-NK4穿梭质粒,脂质体法在293细胞中包装重组腺病毒；噬斑分析法筛选单克隆重组腺病毒；RT-PCR检测NK4基因的转录；Western Blot检测NK4蛋白的表达.结果:成功构建出成功构建出HTERT 启动子调控的NK4基因重组腺病毒,滴度为4.5×109空斑形成单位(pfu)/mL,且PCR扩增及westernbolt电泳均呈阳性表达.结论:成功构建出HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒,为进一步研究NK4基因的作用机制打下实验基础.
关键词： 人端粒酶逆转录酶启动 NK4基因 腺病毒
