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诱导表达调控文献资料
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受强力霉素调控的真核表达系统RAW264.7Tet-lon细胞株的建立
目的:利用Tet-lon诱导表达调控系统构建可以用强力霉素调控表达的RAW264.7 Tet-lon细胞株,探讨目的基因NF-kB的作用.方法:将调控质粒pCDNA6/TR转染RAW264.7细胞,经潮霉素筛选得到稳定单克隆.单克隆扩大培养后,转染pCDNA4/TO/lacZ质粒,再经过强力霉素诱导表达,检测β-半乳糖苷酶(β-gal)活性,筛选出受强力霉素调控的高诱导水平、低背景表达的RAW264.7 Tet-on细胞株.结果:成功建立一株受强力霉素调控的高诱导水平、低背景表达的细胞株RAW264.7 Tet-on 3,并且强力霉素对下游基因β-gal的诱导效果具有浓度和时间依赖性,强力霉素的佳诱导时间为24h,强力霉素的佳诱导质量浓度为1μg/mL.结论:已获得受强力霉素调控的细胞株.
关键词： 强力霉素 转染 诱导表达调控 RAW264.7细胞株
