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真核准表达文献资料
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分泌型Survivin真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达
目的:构建含6个组氨酸标签(His6)的小鼠存活素(Survivin)融台蛋白的真核表达载体,及其在真核细胞中的表达.方法:根据小鼠Surivin序列设计引物,经过RT-PCR克隆5urvivin的Cdna并进一步构建分泌型Sar-vivin的真核表达载体,经测序鉴定后在大肠杆菌中扩增在HeLa细胞中表达;以金属离子螯合层析富集,再用免疫印迹法鉴定.结果:克隆到Surivin编码区全长序列,经DNA测序后证明与已报道序列相同.构建氨基端融合小鼠IL-2信号肽,羧基端带有His6标签的Survivin融合蛋白的真棱表达载体,在HeLa细胞中转染成功并且表达;细胞上清经HisTmp HP柱层析富集后,进行免疫印迹分析,表明该融合蛋白以分泌型方式在HeLa细胞中表达.结论:成功克隆Survivin的Cdna,并构建其分泌型真核表达载体.
