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  • 融合蛋白 GSH-bFGF 的构建、表达及体外活性检测

    作者:陈霖;周天鸿;邹奕

    目的:设计构建和表达新型融合蛋白谷胱甘肽-碱性成纤维细胞生长因子(Glutathione-basic fibroblast growth factor,GSH-bFGF),并检测其体外抗氧化、抗衰老能力.方法:采用 RT-PCR,酶切,连接,转化等分子克隆技术构建新型融合蛋白 GSH-bFGF,并通过镍柱亲和层析、阳离子交换层析纯化该目的蛋白.通过 CCK-8试剂盒检测GSH-bFGF 对鼠源成纤维细胞 NIH-3T3的促增殖活性.同时,经总抗氧化检测试剂盒检测 GSH-bFGF 的抗氧化能力.结果:克隆表达并纯化获得融合蛋白 GSH-bFGF.CCK-8促增殖结果显示质量浓度为20 ng/mL 的 GSH-bFGF 可显著促进鼠源成纤维细胞 NIH-3T3增殖.体外抗氧化结果显示 GSH-bFGF 有显著的抗氧化活性,纯化得到的 GSH-bFGF 蛋白的 GSH 浓度约为(0.06±0.02)μmol/L,抗氧化能力为(0.56±0.23)mmol/g.结论:新型融合蛋白 GSH-bFGF 有显著的体外促增殖能力及抗氧化活性.

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