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pellino-1文献资料
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过表达pellino-1在Kupffer细胞内毒素耐受时对TRAF3泛素化及MAPK信号通路的调控
[目的]探讨上调pellino-1在Kupffer细胞(KC)内毒素耐受时对肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)泛素化、促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路及下游细胞因子分泌情况的影响.[方法]分离、培养C57BL/6小鼠KC,随机分为2组:①空载对照组:转染空载质粒48 h后,先给予小剂量LPS(10 ng/mL)刺激24 h,再给予大剂量LPS(300 ng/mL)刺激.②过表达组:过表达pellino-1慢病毒转染48 h后,先给予小剂量LPS(10 ng/mL)刺激24 h,再给予大剂量LPS(300 ng/mL)刺激.两组分别于处理后0、5、10、30、60 min收获细胞,蛋白质免疫印迹试验(Western blot)检测pellino-1、K48泛素化(K48 ubiquitin,K48-Ub)、TRAF3、JNK、p-JNK、p38、p-p38蛋白水平表达变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中IL-1β、TNF-α及IL-10的分泌情况.[结果]与空载对照组相比,过表达组pellino-1蛋白表达量在各个时间点均明显升高;K48-Ub水平明显升高;TRAF3蛋白表达量明显降低;JNK、p38蛋白表达量没有明显变化,但p-JNK及p-p38蛋白表达量显著升高;过表达组细胞上清中IL-1β及TNF-α的量明显升高(P<0.05),而IL-10的量则明显降低(P<0.05).[结论]过表达pellino-1可促进TRAF3蛋白K-48泛素化降解,导致TRAF3蛋白表达量降低,激活下游的MAPK信号,从而抑制内毒素耐受的形成.
