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miR-210 inhibitor对大鼠背脊髓神经元细胞氧化应激的保护作用
[目的]观察miR-210 inhibitor对大鼠背脊髓神经元细胞氧化应激的保护作用.[方法]体外培养大鼠背脊髓神经元细胞,随机分成正常组,H2O2组,H2O2联合miRNA Negative control组以及H2O2联合miR-210 inhibitor组.采用MTT法检测细胞的存活率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧,Elisa检测NOX2.[结果]qPCR结果显示,100 μmol/L H2O2处理可导致大鼠背脊髓神经元细胞内miR-210表达量上升7.34倍;转染miR-210 inhibitor可明显抑制miR-210的表达量;MTT结果显示,抑制miR-210的表达可明显降低H2O2对大鼠背脊髓神经元细胞存活率的抑制作用;流式细胞仪检测发现抑制miR-210的表达可以明显阻止H2O2对大鼠背脊髓神经元细胞凋亡的诱导,显著降低凋亡率;进一步研究发现,转染miR-210 inhibitor可显著性降低H2O2诱导的细胞内NOX2和ROS的表达.[结论]H2O2刺激鼠脊髓神经元细胞导致细胞内miR-210表达的上调;降低miR-210的表达能够降低细胞内NOX2和ROS的表达,抑制NOX2/ROS通路从而减缓H2O2对大鼠背脊髓神经元细胞造成的损伤,推测miR-210可以作为脊髓损伤治疗的靶点.
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他克莫司刺激星形胶质细胞分泌EGF促进神经细胞突起生长的研究
目的 研究星形胶质细胞分泌的EGF在他克莫司(FK506)促进神经细胞突起生长过程中的作用.方法 取2日龄SD大鼠和孕15 d SD大鼠,分别体外分离培养脊髓星形胶质细胞和脊髓神经元细胞,分别进行免疫荧光染色鉴定.将脊髓星形胶质细胞分为两组,实验组采用20 μmol/L FK506培养液培养,对照组用不含FK506的培养液培养,24 h后收集上清制备条件培养液和细胞,分别行ELISA检查和实时荧光定量PCR (real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测EGF蛋白和基因表达.分别使用实验组和对照组条件培养液(分别为A、B组)和加入EGF中和抗体中和后的对照组和实验组条件培养液(分别为C、D组)培养脊髓神经元细胞,3d后对脊髓神经元细胞的突起长度进行测量,比较神经突总长度和长神经突长度.结果 经免疫荧光染色鉴定,所培养细胞分别为脊髓星形胶质细胞和神经元细胞.ELISA检测示,实验组EGF含量为0.241±0.044,显著高于对照组的0.166±0.014(t=3.93,P=0.01);RT-qPCR检测得到了相同结果,实验组EGF基因相对表达量为1.12±0.25,显著高于对照组的0.46±0.11(t=5.78,P=0.00).神经突长度测量显示,C、D组神经突总长度和长神经突长度均显著小于A、B组(P＜0.05),A组均明显大于B组(P＜0.05),C、D组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脊髓星形胶质细胞分泌的EGF能够促进神经元细胞突起的生长,可作为FK506促进神经功能恢复的一个重要中介靶点.
