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VSVG-YFP文献资料
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ARF鸟苷酸交换因子BIGs对高尔基体相关的囊泡转运的调控作用
[目的]探讨ARF鸟苷酸交换因子BIG1和BIG2在高尔基体相关囊泡转运方面的功能.[方法]利用脂质体将siRNA干扰序列转入细胞中,westemm blotting方法检测转染效率；利用细胞免疫荧光染色方法检测Hela细胞中BIGs蛋白水平的表达分布;采用Alexa568标记的转铁蛋白孵育Hela细胞,检测转铁蛋白相关的内吞体循环；利用脂质体转染VSVG-YFP病毒质粒,检测新生蛋白经从内质网经高尔基体转运至胞膜的途径.[结果]BIG1和BIG2的siRNA干扰效率均高于70％,且特异性良好;干扰掉BIGs后,细胞内TGN230结构变松散,呈现短片状或点状；干扰BIG2可导致细胞内转铁蛋白的积聚,而同时干扰BIG1则可进一步加剧转铁蛋白的积聚;BIG1或/和BIG2干扰均抑制了新生蛋白的从内质网向高尔基及细胞表面的转运过程.[结论]BIGs蛋白主要位于反面高尔基体网络,对维持其结构完整性非常重要；它们均参与调控高尔基体相关的囊泡转运,两者具有协同作用.
