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实时荧光环介导恒温扩增文献资料
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实时荧光环介导恒温扩增技术检测嗜麦芽窄食单胞菌方法的建立
目的：建立嗜麦芽窄食单胞菌16S ribosomal RNA基因的实时荧光环介导恒温扩增（ RealAmp）快速检测方法，为嗜麦芽窄食单胞菌的快速检测提供一种新的方法。方法针对嗜麦芽窄食单胞菌16S ribosomal RNA基因设计的特异性引物，利用链置换DNA聚合酶（ Bst DNA polymerase ）恒温反应60 min，通过实时检测荧光信号来检测嗜麦芽窄食单胞菌16S ribosomal RNA基因的扩增。结果筛选实验发现：在使用引物4时，出峰时间短，故选择引物4进行后续实验操作。在11株相关菌株的检测中，除嗜麦芽窄食单胞菌出现很好的阳性外，其余菌株均为阴性。本研究检测嗜麦芽窄食单胞菌DNA的灵敏度可达到4．07×10－5 ng／μL。重复性分析表明：同一样品重复检测3次，几乎同时出峰，扩增曲线几乎重叠，说明RealAmp的重复性良好。结论嗜麦芽窄食单胞菌的RealAmp检测方法稳定性高，反应快速，特异性强，具有较大的推广及应用前景，可用于嗜麦芽窄食单胞菌的快速检测。
关键词： 嗜麦芽窄食单胞菌 环介导恒温扩增 实时荧光环介导恒温扩增
