您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
荧光 PCR 熔解曲线法文献资料
-
滤纸干血斑 DNA 自动化提取及其在地中海贫血基因诊断中的应用
目的：研究滤纸干血斑（DBS）DNA 的自动化提取方法及其在地中海贫血（地贫）基因诊断中的应用。方法将276份经静脉血标本基因检测确诊为地贫的孕妇外周血标本按照研究需要分别制成240份合格、18份渗透不良和18份重复滴血滤纸干血斑标本，并模拟不同的运输和储存条件。使用 Lab-Aid 820核酸提取仪对滤纸干血斑进行 DNA 提取，考察不同的起始血斑用量检测的准确度，对提取的 DNA 进行浓度和纯度分析，并分别使用荧光 PCR 熔解曲线法和 PCR 联合膜杂交法对DNA 进行地贫基因检测。结果276份滤纸干血斑标本提取的 DNA 浓度9.85～29.56 ng／μl，纯度1.63～1.95，均能满足试剂盒检测要求，其中2种基因型检测方法的检测结果100％符合，2种方法均检出地贫基因突变 IVS-Ⅱ-654（C ＞T）、-28（A ＞G）、CD17（A ＞T）、CD26（G ＞A）、CD41／42（-TTCT）、--αSEA、-α3.7、--α4.2、αCSα，所有结果均与使用静脉血提取 DNA 作为标本的检测结果100％符合，覆盖了目前临床上常见的各种基因型。结论DBS 标本对运输、保存要求较低，结合自动化核酸提取仪提取 DNA，操作简单、提取结果稳定，可用于临床筛查地贫基因。
关键词： 干血斑 地中海贫血 DNA 提取 荧光 PCR 熔解曲线法
