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小分子泛素样修饰蛋白文献资料
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VEGF与SUMO在大肠杆菌中融合高效表达及纯化
目的 研究血管内皮生长因子(VEGF)与小分子泛素样修饰蛋白(SUMO)融合并转入大肠杆菌BL21中进行VEGF的可溶性高效表达. 方法 采用PCR扩增方法,获得编码VEGF与SUMO融合蛋白的DNA片段并插入表达载体pET3c中,构建重组表达载体pET3c-SUMO-VEGF,转化到大肠杆菌B121中,获得重组菌株BL21/pET3c-SUMO-VEGF.以IPTG为诱导剂,对阳性重组茼株的诱导表达参数如诱导剂浓度、诱导温度、诱导时间等进行优化.结果 融合蛋白的佳表达条件为当OD600约0.6时,加入0.5mMIPTG,20℃诱导24h,获得了纯度达70%以上的SUMO-VEGF.结论 通过融合表达,解决VEGF独立表达时表达量低和可溶性差的问题,使其商业化的步伐进一步加快.
关键词： 血管内皮生长因子 小分子泛素样修饰蛋白 融合蛋白 高效表达
