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人细胞空泡蛋白分选因子4A文献资料
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hVPS4A 基因克隆及真核表达载体的构建
目的：克隆人细胞空泡蛋白分选因子4A（human vacuolar protein sorting 4A，hVPS4A）基因，构建其真核表达质粒。方法以 Huh7细胞 cDNA 为模板，设计引物扩增全长 hVPS4A 基因，再将目的基因插入到真核载体 pRK5中。重组质粒经PCR、酶切和 DNA 测序确认。结果从 Huh7细胞 cDNA 中扩增得到约1350 bp 大小的目的片段，经回收、纯化、酶切后与载体pRK5连接，转化 DH5α大肠杆菌。选择 PCR 鉴定阳性的重组质粒，经 EcoRⅠ单酶切可见约一条5900 bp 片段；经 EcoRⅠ和HindⅢ双酶切可得到4600 bp 和1350 bp 两个片段，分别与载体 pRK5和目的片段 hVPS4A 预期大小一致；DNA 测序结果显示插入片段与 hVPS4A 参考序列一致。结论成功构建了含 hVPS4A 基因的真核表达载体，为进一步研究 hVPS4A 的生物学功能提供了条件。
关键词： 人细胞空泡蛋白分选因子4A 基因克隆 真核表达
