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双抗夹心法酶联免疫吸附试验文献资料
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双抗夹心法酶联免疫吸附试验影响因素探析
目的：探析双抗夹心法酶联免疫吸附试验中牛血清清蛋白封闭，吐温20及浓度，样品与检测抗体的加样方式及孵育温度对酶联免疫吸附试验检测结果的影响。方法双抗夹心法酶联免疫吸附试验检测人白细胞介素（IL ）‐1Ra细胞因子作为模型，检测封闭条件，吐温20及其不同浓度，样品与检测抗体分开孵育及共同孵育，酶联孵育温度对标准品浓度与 OD值关系的影响。结果酶联免疫吸附试验不封闭、洗液吐温浓度为0．05％且孵育温度为37℃的R2＝0．9957；BS A封闭的 R2＝0．9811；洗液中吐温浓度0．005％时 R2＝0．9915，0．5％时 R2＝0．9868；样品和检测抗体一同孵育1 h或2 h的R2分别为0．9645和0．8742；孵育温度为25℃的R2＝0．9961。结论BSA封闭步骤对低浓度的样品检测灵敏度不强；样品和检测抗体及酶稀释液中必须含有吐温20且浓度在0．05％条件下合适；样品和检测抗体共同孵育会影响对高浓度样品的检测；37℃和25℃的孵育温度条件下的酶联免疫吸附试验检测灵敏度没有差异，但25℃孵育可以降低 O D值背景。
关键词： 影响因素 标准操作流程 双抗夹心法酶联免疫吸附试验
