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miR-451调控早期糖尿病肾病小鼠肾小球肥大的机制
目的:观察miR-451对早期糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)db/db小鼠肾脏形态学影响,探讨miR-451在DN发病机制中的作用.方法:采用24只7周龄雄性db/db小鼠和8只正常对照db/m小鼠依次分为未处理组、空质粒组、miR-451组及对照组.腹腔注射法进行质粒注射处理2周后,光镜下观察肾小球形态学变化,实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测肾脏组织miR-451的表达水平,Western blot和激光共聚焦检测肾脏组织中miR-451的靶基因酪氨酸-3单氧化酶/色氨酸单氧化酶活化蛋白(tyrosine3-monooxy-genase/tryptophan 5-monooxygenase activation protein,Ywhaz)及其相关的丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)途径中p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK)及其上游激酶MKK3 (MAPK kinase 3)的表达水平.结果:7周龄db/db小鼠未处理组相比对照组出现高血糖且尿白蛋白排泄率(urinary albumin excretion rate,UAE)增加,提示进入早期DN阶段,给予30mg/(kg·d)质粒注射实验2周.光镜观察和肾小球直径测量发现,miR-451处理组肾小球形态减小(P=0.000).Real-time PCR检测显示miR-451组小鼠肾脏组织中miR-451的表达水平增高1.79倍(P=0.002),Western blot和激光共聚焦结果显示,miR-451组较未处理组和空质粒组肾脏组织Ywhaz的表达受到下调,同时p38MAPK及上游激酶MKK3蛋白表达水平减少(P均=0.000).结论:miR-451可能通过直接靶向Ywhaz基因,调控MAPK途径中关键蛋白p38MAPK、MKK3的表达,从而抑制肾小球肥大,在DN发病机制中可能起着重要的作用.
