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新基因hepaCAM对膀胱癌细胞体外生物学影响
目的:研究肝细胞粘附分子(Hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)对人类膀胱癌T24细胞体外生物学影响.方法:脂质体法转染pEGFP-N2-hepaCAM质粒入T24细胞,激光共聚焦显微镜检测其蛋白定位;筛选稳定表达细胞株;Westernblot检测蛋白表达.细胞粘附、基质胶侵袭实验及MTT实验研究该基因对细胞粘附力、活动力及增殖力的影响.结果:hepaCAM在单个细胞中分布在细胞核周边区域;相互连接细胞中主要分布于细胞间相互接触区域.获得稳定表达hepaCAM基因的T24细胞.体外粘附实验、基质胶侵袭实验证明实验组细胞粘附力及活动力明显高于空白组及阴性对照组.MTT法检测转染hepaCAM基因细胞增殖力明显低于空白组及阴性对照组.结论:hepaCAM基因可显著抑制人类膀胱癌T24细胞恶性行为,可能是通过增强细胞-基质间粘附及抑制细胞增殖力从而影响肿瘤细胞的浸润和转移.
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HepaCAM基因对人膀胱癌细胞增殖的抑制作用研究
目的:研究hepaCAM基因对人膀胱癌T24细胞增殖的影响.方法:运用脂质体转染方法,将pEGFP-N2-hepaCAM质粒转入T24细胞株,经G418筛选获得稳定表达的细胞株;RT-PCR及Western blot方法检测目的基因和蛋白表达;MTT法及克隆形成实验研究hepaCAM基因对T24细胞体外生长的作用;流式细胞仪检测细胞周期分布;RT-PCR技术测定周期调控蛋白CyclinD1的mRNA表达变化.结果:RT-PCR和Western blot方法分别检测到hepaCAM的基因表达和蛋白表达,MTT检测转染hepaCAM基因的细胞生长速度较对照组和空载体组明显减慢(P<0.01),克隆形成率明显小于对照组和空载体组(P<0.01).细胞周期中G0/G1期比例明显增高(P<0.05),而S期比例减少;CyclinD1 mRNA表达明显下调(P<0.05).结论:HepaCAM基因通过阻滞细胞于G0/G1期,减少CyclinD1 mRNA表达,抑制T24细胞的增殖.
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hepaCAM基因转染对肾癌786-0细胞增殖和侵袭活性的影响
目的:肝细胞粘附分子(Hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)是近年来发现的-类免疫球蛋白超家族细胞黏附分子,具有抑癌基因特性.本文研究hepaCAM基因转染对肾癌(Renal cell carcinorna,RCC)细胞786-0增殖和侵袭能力的影响.方法:将携有hepaCAM基因的重组质粒hepaCAM-pEGFPN2转染786-0细胞(实验组)后用G418筛选形成阳性克隆并扩增培养,以转染了pEGFPN2(空载组)和未转染的786-0细胞(空白组)为对照,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)Ty法检测hepaCAM mRNA的表达,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测786-0细胞增殖活性,Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力.结果:稳定转染hepaCAM后786-0细胞的hepaCAM mRNA表达水平明显上调(P<0.01),MTT显示实验组与空载组相比heP-aCAM基因抑制细胞成活率在4、5、6 d分别为26.5%、38.1%、35.7%(P＜0.01);侵袭实验显示细胞穿透ECM膜的数目为24.6 ±5.3(实验组)、35.5 4±6.23(空载组)和37.1±7.0(空白组),实验组细胞明显少于2对照组(P<0.01).结论:抑癌基闪hepaCAM转染能降低肾癌细胞786-0的增殖和侵袭活性.
