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Lrtm1基因文献资料
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Lrtm1基因在成肌分化过程中的功能探索
目的:观察成肌分化过程中C2C12细胞Lrtm1表达;构建小鼠Lrtm1慢病毒过表达载体;筛选稳定表达外源Lrtm1细胞株诱导其分化后观察对成肌分化标志基因Myogenin、Myosin的影响;发现Lrtm1蛋白质表达水平受调控的机制.方法:诱导C2C12细胞分化用Hoechst染色细胞核;将小鼠Lrtm1基因连接到慢病毒载体质粒pLJM1-GFP上并进行慢病毒包装;筛选稳定过表达Lrtm1基因的C2C12细胞系,诱导分化Lrtm1-DDK组、GFP组检测对成肌分化标志基因Myogenin、Myosin表达的影响;MG132处理C2C 12-Lm 1-DDK细胞系后,观察内源性Lrtm1蛋白质表达.结果:诱导分化过程中,肌管形成,Lrmt1、MyosinmRNA水平随分化的进行表达上升;成功构建重组pLJM1-Lrtm1-DDK表达载体;成功筛选稳定表达外源Lrtm1细胞株;诱导稳定细胞系分化后,real-time PCR在144 h时显示Lrtm 1-DDK组(272.1±18.22)Myogenin mRNA水平较GFP组(332.41±41.21)减少(P＜0.05);Lrtm1-DDK组(76.11±10.47)Myogenin mRNA水平较GFP组(145.51±10.02)减少(P＜0.05);C2C12细胞中Lrtm1蛋白质被蛋白酶体降解.结论:Lrtm1基因在成肌分化过程中高表达;过表达Lrtm1基因部分抑制了Myogenin、Myosin基因的表达;Lrtm1蛋白质表达水平受蛋白酶体降解调控.
