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生物工程方法文献资料
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一种构建HBV聚合酶特定位点多种突变的方法
核苷(酸)类似物[neocleot(s)ide analogues,NUCs]在治疗乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染的过程中常见的一个问题就是耐药的产生.耐药的产生与HBV逆转录酶(reverse transcriptase,RT)区特定位点突变具有直接关系.现有的体外表型分析方法存在固有的限制.本文提出一种构建HBV聚合酶特定位点多种突变的新方法,即位点特异性随机突变,通过一轮聚合酶链式反应扩增,在RT区特定位点引入多种突变形式,再结合golden-gate克隆法以及片段替换反应(fragment substitution reaction,FSR)将包含不同突变的DNA片段克隆到相应载体中以进行下一步分析.通过这种方法,构建了阿德福韦(adefovir,ADV)耐药位点rt181和rt236位点的多种突变形式.
