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重组慢病毒感染文献资料
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重组慢病毒介导人凝血Ⅸ因子基因感染HUCMSCs的实验研究
目的 探讨慢病毒介导人凝血Ⅸ因子(human clotting factorⅨ,hFⅨ)感染人脐带间充质干细胞(human ambilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)后hFⅨ的表达情况.方法 重组构建慢病毒载体GV240-hFⅨ-EGFP.以脂质体介导法共转染293T细胞包装生产慢病毒.以不同感染复数(multiple of infection,MOI)感染hUCMSCs,荧光显微镜观察细胞感染效率,流式细胞仪检测验证.以适MOI感染hUCMSCs,RT-PCR检测hFⅨmRNA水平,ELISA检测FⅨ蛋白含量(FⅨ∶Ag)及一期法检测FIX凝血活性(FⅨ∶C).结果 制备出了滴度为2×108TU/mL的重组慢病毒.MOI=10时能高效感染hUCMSCs,感染效率为(92.92±6.32)％.RT-PCR结果示只有转染组有hFⅨmRNA转录.感染后1d,hUCMSCs即可有效分泌hFⅨ,在5d时达到高峰,FⅨ∶Ag为(87.18 ±0.86)ng/(106·24 h),FⅨ∶C为(44.3±3.2)％,高水平分泌可至少持续29 d.结论 重组GV240-hFⅨ-EGFP慢病毒感染hUCMSCs后能持续高水平分泌具有凝血功能活性的hFⅨ蛋白.
