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核受体及核受体辅活化子对芳香族化酶基因转录调控的研究
目的研究核受体及核受体辅活化子对芳香族化酶基因转录的调控.方法酵母单、双杂合筛选、蛋白质-蛋白质相互作用分析、DNA突变、报告基因转染功能分析、迁移率改变及足迹分析等技术.结果①鉴定了主导芳香族化酶基因在乳腺癌细胞中表达的启动子I.3和启动子Ⅱ的确切位置以及对这两个启动子起调节作用的沉默子(Silencer) S1和cAMP效应要素(CREaro)等顺式作用元件.②分离鉴定了能与类固醇衍生因子1(Sterodogenic Factor1,SF1)相互作用并参与芳香族化酶基因转录调控的转录因子,其中近50%的克隆编码两种新的富含脯氨酸的核受体辅调节蛋白质,命名为PNRC(Proline-rich Nuclear Receptor Coactivators).功能分析显示PNRC通过与SF1或ERR1相互作用,进一步增强SF1或ERR1对芳香族化酶基因启动子1.3的转录激活作用.③缺失突变及定点突变分析证明含SH3结合模体的23个氨基酸残基区域是PNRC分子与核受体的相互作用位点.结论我们鉴定了主导芳香族化酶基因在乳腺癌细胞中表达的启动子及调控序列,克隆了与DNA调控序列结合的蛋白质和通过蛋白质相互作用参与芳香族化酶基因转录调控的转录因子--一种新型的核受体辅活化子PNRC.
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毒杀芬对孤儿受体雌激素相关受体1(ERR α-1)的拮抗作用
目的研究毒杀芬(Toxaphene)对孤儿受体雌激素相关受体1(Estrogen-related receptor,ERRα-1)活性的影响.方法细胞瞬时和稳定转染及氯霉素酰基转移酶和芳香族化酶活性测定.结果毒杀芬抑制了由ERRa-1所介导的氯霉素酰基转移酶的转录表达和辅活化子(Coactivator)GRIP1诱导的ERRa-1的活性.在构建的稳定高表达ERRa-1的HepG2肝癌细胞株中,ERRa-1增加了芳香族化酶的转录表达,ERRα-1高表达细胞株与10 μmol/L浓度的毒杀芬温育24 h后,芳香族化酶活性降低到非ERRa-1转染的HepG2细胞中芳香族化酶活性的水平.结论毒杀芬是ERRα-1的拮抗剂,它拮抗了ERRa-1调节芳香族化酶转录的作用,从而使该酶的表达量降低.
