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miRNA-146a对乙型肝炎病毒生活周期的影响及机制研究
目的 研究微小RNA-146a(microRNA-146a,miR-146a)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)生活周期的影响及其可能机制.方法 利用miRNA芯片比较HepG2.2.15细胞与HepG2细胞miRNAs表达谱差异,选择miR-146a为研究对象,RT-PCR验证芯片结果.在HepG2.2.15细胞中分别转染miR-146a mimic和inhibitor,RT-PCR检测HBV复制水平,ELISA和Western blot检测蛋白水平.双荧光素酶报告系统进一步验证miR-146a与潜在靶点HS3ST3B1相互作用.HepG2.2.15细胞中转染miR-146a mimic,RT-PCR和Western blot分别检测HS3ST3B1 mRNA和蛋白水平.结果 miRNA芯片发现72条miRNAs在HepG2.2.15中表达发生变化,其中27条上调,45条下调,RT-PCR证实,miR-146a在HepG2.2.15细胞(1.55±0.13)中表达水平明显高于HepG2细胞(1.00±0.01)(P＜0.05).HepG2.2.15细胞转染miR-146a mimic后,HBV复制和蛋白水平较对照组明显升高(P＜0.05);转染miR-146a inhibitor后,HBV复制和蛋白表达水平较对照组明显降低(P＜0.05).生物信息学预测发现HBV抑制因子HS3ST3B1是miR-146a的潜在靶点,双荧光素酶报告系统显示,HS3ST3B1野生型载体的报告荧光较对照组明显下调(P＜0.05),突变预测靶位点后,HS3 ST3B1突变型载体的报告荧光与对照组差异无统计学意义(P＞0.05).HepG2.2.15细胞中转染miR-146a mimic后,HS3ST3B1 mRNA水平较对照组差异无统计学意义(P＞0.05),HS3ST3B1蛋白水平较对照组明显下调.结论 miR-146a能影响HBV生活周期,miR-146a可能通过作用于HBV抑制因子HS3 ST3B1 3'UTR抑制其翻译从而影响HBV生活周期.
关键词： 乙型肝炎病毒 微小RNA-146a 硫酸类肝素3氧磺基转移酶
