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人CD137文献资料
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人重组CD137-Fc分子的构建与真核表达
目的构建人CD137-Fc基因的真核表达质粒,并表达有生物学活性的纯化人CD137-Fc融合蛋白.方法从cDNA文库中用PCR扩增CD137全长编码基因,并导入真核表达载体pcDNA3中.测序证实后,继续用PCR扩增其膜外区cDNA,,酶切后与hIgG1Fc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中,转染293T细胞瞬时表达,用夹心ELISA检测其表达情况,经蛋白A亲和纯化,用SDS-PAGE与免疫印迹进行鉴定.结果测序证实构建的CD137与CD137-Fc cDNA阅读框完整,连接部位序列正确;ELISA证实CD137-Fc蛋白的表达;SDS-PAGE与免疫印迹证实其为人CD137-Fc蛋白.结论获得了纯化的hCD137-Fc融合蛋白,为探讨CD137在免疫自稳调节中的地位,以及探索CD137的其它生物学功能奠定了坚实的实验基础.
