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PPARγ-LBD文献资料
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核受体PPARγ-LBD在原核系统的适表达及纯化
目的探索诱导PPARγ-LBD的适表达条件,提高可溶性PPARγ-LBD蛋白在大肠杆菌中的表达量,然后用Ni2+-NTA离子交换树脂对表达蛋白进行分离纯化.方法 PPARγ-LBD在大肠杆菌BL21(DE3 )中进行诱导表达时,以不同IPTG浓度、不同温度(37 ℃,30 ℃,20 ℃),确定可溶性PPA Rγ-LBD蛋白表达的适条件;然后用Ni2+-NTA离子交换树脂进行分离纯化,其产物进行SDS-PAGE纯度分析和Western blotting鉴定.结果建立了重组蛋白PPARγ-LBD的适诱导条件,即0.5 mmol/L IPTG浓度,20 ℃诱导14 h其可溶性表达蛋白的量高;纯化产物经SDS-PAGE纯度分析大于90%以上;Western blotting检测,纯化产物为PPARγ-LBD目的蛋白,其分子质量约34×103.结论重组蛋白P PARγ-LBD在E.coli中进行了成功表达和纯化,并且降低温度可提高可溶性蛋白PPARγ -LBD表达量达50%以上.
