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pCS2+-FLASH重组质粒的构建及斑马鱼FLASH基因反义mRNA探针的制备
目的 构建斑马鱼pCS2+-FLASH重组质粒,制备斑马鱼FLASH 反义mRNA探针.方法 提取斑马鱼胚胎总RNA后经RT-PCR克隆斑马鱼FLASH基因片段,将得到的FLASH片段和pCS2+质粒用BamHⅠ及HindⅢ双酶切后插入pCS2+质粒,通过对重组质粒进行双酶切及插入片段序列测序鉴定后,经T3 RNA体外转录体系合成DIG-FLASH基因反义mRNA探针.结果 RT-PCR法扩增出长度为533 bp的特异性产物,构建的pCS2+-FLASH重组质粒经酶切鉴定和测序结果 与预期相符;用FLASH反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交,观察到FLASH在野生型斑马鱼神经系统中存在表达.结论 成功构建了pCS2+-FLASH重组质粒及FLASH基因反义mRNA探针.
