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PTZU6+1文献资料
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端粒酶逆转录酶启动子hTERT/U6嵌合启动子的siRNA表达载体的构建及鉴定
目的 构建有hTERT/U6嵌合启动子的小干扰RNA(small interfere RNA,siRNA)表达载体,并用分子生物学的技术和方法验证其对肝癌细胞SMMC-7721的效应.方法 构建siRNA-EGFP-PTZU6+1表达载体,将其转染到稳定表达EGFP的肝癌细胞株7721(EGFP-7721),观察细胞荧光的变化及RT-PCR,Western blot筛选出更有效的siRNA-EGFP-FIEU6+1载体.PCR扩增端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase promoter,hTERT)启动子的核心序列,构建针对EGFP基因的hTERT/U6嵌合启动子siRNA表达载体(EGFP-siRNA-PTZU6+1-U6/hTERT),正向和反向插入的hTERT启动子各1个,并将其转染至EGFP-7721细胞中,RT-PCR验证其效应.结果 RT-PCR,Western blot结果表明两重组质粒siRNA-EGFP-PTZU6+1转染EGFP-7721细胞后EGFP基因的表达无统计学差异,但与对照组比较均显著抑制了EGFP基因(P＜0.01).而且,RT-PCR结果显示,反向插入的重组质粒EGFP-siRNA-PT-ZU6+1-U6/hTERT与对照组相比显著抑制了EGFP基因的表达(P＜0.05).结论 构建的含hTERT/U6嵌合启动子的siRNA表达载体在肝癌细胞中具有功能活性,为探讨基因的靶向治疗奠定了基础.
关键词： 端粒酶逆转录酶启动子 嵌合启动子 siRNA表达载体 PTZU6+1 siRNA
