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Hepa1-6肝细胞文献资料
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DUSP9真核表达载体的构建及其在Hepa1-6肝细胞中的表达
目的 构建小鼠DUSP9基因真核表达载体,并在小鼠Hepa1-6肝细胞中表达DUSP9蛋白.方法 采用RT-PCR方法,从小鼠肝组织获取DUSP9 cDNA片断,经双酶切、连接重组至真核表达载体pEGFP-N1,构建pEGFP DUSP9重组质粒,双酶切及DNA测序对该重组质粒进行鉴定.脂质体介导pEGFP-DUSP9转染Hepa1-6肝细胞,实时荧光定量PCR、Western blot检测DUSP9 mRNA及蛋白表达水平的变化.结果 pEGFP DUSP9重组质粒经双酶切及测序鉴定证明构建完全正确,成功转染Hepa1-6肝细胞并高效表达,检测到明显上调的DUSP9 mRNA和蛋白表达水平.结论 成功构建真核表达载体pEGFP-DUSP9,并在Hepa1-6肝细胞中表达了DUSP9蛋白,可为研究DUSP9的生理功能及了解其在糖、脂代谢、胰岛素抵抗进程中的作用奠定坚实的基础.
关键词： 真核表达载体 Hepa1-6肝细胞 实时荧光定量PCR DUSP9基因
