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高效液相色谱-串联质谱法测定儿童末梢全血干血点中的维生素D
目的 建立末梢全血干血点中25-羟基维生素D3(25-OH-Vit D3)与25-羟基维生素D2(25-OH-Vit D2)的高效液相色谱-串联质谱定量检测方法,并分析北京与西宁地区7岁以下儿童维生素D营养状况,为两地佝偻病防治提供依据.方法 末梢全血干血片样本经甲醇超声沉淀蛋白,乙酸乙酯萃取,和PTAD衍生,衍生产物用ZORBAXSB-Phenyl色谱柱分离,质谱多重反应监测(MRM)模式检测,同位素内标法定量.结果 25-OH-Vit D3与25-OH-Vit D2在0.50-100 ng/ml与0.50-50 ng/ml线性范围内线性良好(R2＞0.99),低定量限(LLOQ)均为0.5 ng/ml.高、中、低3个浓度水平的批内相对标准偏差(RSD％)小于9％,批间RSD％小于11％,回收率范围为87.36％ ～113.58％.北京与西宁两地25-OH-Vit D含量水平及维生素D营养状况与既往研究一致.结论 本方法快速、准确、样品需求量小,全血干血点25-OH-Vit D经红细胞比容校正后可有效评估维生素D营养状况,适用于有限采血条件下人群维生素D营养状况评估.
关键词： 25羟维生素D3 25羟维生素D2 干血点 高效液相色谱-串联质谱法 -
超高效液相色谱-串联质谱法测定干血点中25-羟基维生素D
目的 建立干血点中25-羟基维生素D2[25 (OH) D2]和D3[25 (OH) D3]的超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)同时测定方法.方法 干血点经过定量取样,加水超声提取后加乙腈沉淀蛋白,再使用乙酸乙酯:正己烷(2∶1,Ⅴ/v)萃取,氮气吹干后加PTAD试剂衍生,氮吹干后用流动相复溶,使用Waters BEH C18柱分离、电喷雾正离子(ESI+)模式和多反应监测(MRM)检测,同位素内标法定量.结果 25(OH) D2和25(OH) D3分别在全血浓度为5～167ng/mL和1.7 ～ 167ng/mL的范围内呈良好的线性关系,相关系数r＞0.999;检出限(LOD)分别为1.5ng/mL和0.25ng/mL,定量限(LOQ)分别为5ng/mL和1.7ng/mL;样品高低两水平的加标回收率均＞80％,日内精密度均＜9％,日间精密度均＜10％.结论 该方法需血量少、灵敏、快速、准确,适用于人群维生素D营养状况的监测.
关键词： 25-羟基维生素D 干血点 衍生 同位素内标 超高效液相色谱-串联质谱法
