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LLC-MK2恒河猴肾细胞文献资料
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基于pGL-4载体的雌激素受体报告基因实验系统的建立与验证
目的 建立和评价一种新的基于pGL-4载体的雌激素受体报告基因实验系统.方法 通过瞬时共转染将雌激素受体表达载体、报告基因载体和内参载体转入LLC-MK2细胞,用特定浓度受试物进行染毒并观察其反应.结果 (1)细胞毒性试验显示,除双酚A和壬基酚在1 00 μmol/L时有细胞毒性外,其余受试物在设定浓度未见细胞毒性.(2)雌激素受体oα报告基因实验系统低检测限为1.9×10-11 mol/L,雌二醇和己烯雌酚在10-8mol/L分别产生30.7倍和24.1倍对照组的荧光素酶表达,双酚A、壬基酚和染料木黄酮均能诱导该系统荧光素酶的表达,他莫昔芬和染料木黄酮能抑制雌二醇诱导的荧光素酶表达.(3)雌激素受体β报告基因实验系统中,雌二醇和己烯雌酚分别产生对照组14.4倍和5.6倍荧光素酶表达.结论 基于pGL-4载体建立的雌激素受体报告基因实验系统有着良好的重复性、灵敏度和特异度,且能检测不同雌激素受体亚型的激动剂和拮抗剂,是一种新的用于内分泌干扰物大通量筛选的报告基因实验系统.
关键词： pGL-4载体 报告基因实验 雌激素受体 LLC-MK2恒河猴肾细胞 荧光素酶
