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肿瘤超声抗原疫苗联合低剂量环磷酰胺在小鼠体内抗肿瘤效应的研究
目的 探索肿瘤超声抗原疫苗联合低剂量环磷酰胺(CTX)的抗肿瘤效应.方法 C57BL/6雄性小鼠48只,随机分为PBS对照组、CTX组、FBL3超声抗原疫苗组、FBL3超声抗原疫苗联合CTX组.按程序免疫3次后,每组随机取4只小鼠,流式细胞术比较脾细胞中CD4+CD25+Treg及CD8+T细胞比例,MTT法比较脾细胞杀伤FBL3功能,各组其余小鼠接种FBL3肿瘤细胞,观察成瘤时间及肿块大小.结果 超声抗原疫苗不能诱导CD8+T细胞比例升高(P＞0.05);CTX可下调Treg细胞数量(P＜0.05);疫苗和CTX均可提高脾细胞体外肿瘤杀伤率并能缩小肿块体积、延长小鼠成瘤时间,两者联合显示更强的抗肿瘤效应.结论 肿瘤超声抗原疫苗联合小剂量CTX可能通过提高体液免疫或固有免疫发挥抗肿瘤效应.
关键词： 超声抗原 环磷酰胺 调节性T细胞(CD4+CD25+Treg) 抗肿瘤 -
结核分枝杆菌蛋白抗原刺激人γδT细胞的活性单位的计算方法
目的 以检测和计算结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)蛋白抗原激活人γδT细胞增殖的活性单位为指标,比较不同提取分离方法制备的Mtb抗原制剂激活人γδT细胞的活性效价.方法 培养的Mtb-H37Ra菌株通过高温和超声方法处理,分别获取Mtb耐热抗原(Mtb-HAg)和超声处理抗原(Mtb-SoAg),采用超滤离心管(3 K,10K,30 K)和快速液相蛋白层析(FPLC)分组和分离,获取不同相对分子质量组分的抗原.采集健康成年人外周血分离获取PBMC,加入不同质量浓度梯度的Mtb蛋白抗原或其分离组分,并加IL-2培养12d后荧光抗体染色,流式细胞仪检测和分析扩增T细胞中γδT细胞的比例,以扩增γδT细胞高比例的50％ (EC50)所对应的质量浓度计算为1个活性单位.结果 用活性单位计算法分析发现,某批次的Mtb-HAg(591 μg/ml)刺激γδT细胞扩增的EC50为1.4 μg/ml,计算其活性单位为0.71 U/μg;某批次低分子Mtb-SoAg(3 K～10 K)(221 μg/ml)的EC50为0.8 μg/ml,其活性单位为1.25 U/μg.结论 通过比较Mtb蛋白抗原不同批次及其不同组分在不同质量浓度下刺激γδT细胞扩增数量的活性,可以计算获得相应的活性单位,为检测Mtb蛋白抗原制剂刺激γδT细胞增殖活性建立了标准化的计算方法.
