您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
JM109文献资料
-
稳定沉默Beclin1的人成神经瘤SH-SY5Y细胞系的构建
为了构建pGenesil-1-Beclin1真核表达载体,并建立Beclin1稳定沉默的人成神经瘤SH-SY5Y细胞系,将合成的shRNA片段连接pGenesil-1质粒,构建成重组质粒pGenesil-1-Beclin1,转化其至感受态大肠杆菌JM109,挑取阳性克隆进行双酶切和DNA测序鉴定.常规培养SH-SY5Y细胞,将重组质粒pGenesil-1-Beclin1和空白对照质粒pGenesil-1转染SH-SY5Y细胞,G418抗性筛选,在荧光显微镜下挑取单细胞克隆并扩大培养至稳定细胞株,经RT-PCR和Western blot检测Beclin1基因的表达.经酶切和DNA测序鉴定重组真核表达载体构建正确,成功筛选出两株细胞系.和对照组转染pGenesil-1的细胞系相比,转染pGenesil-1-Beclin1细胞系的Beclin1 mRNA表达下降71.28％±1.45％ (P＜0.05),Beclin1蛋白表达下降75.50％±2.63％ (P＜0.05).提示已经成功构建pGenesil-1-Beclin1真核表达载体并建立了Beclin1基因稳定沉默的SH-SY5Y细胞系,为研究Beclin1功能提供了细胞模型.
