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重组人骨形态发生蛋白9文献资料
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真核表达重组骨形态发生蛋白9的纯化及生物骨诱导活性分析
本文主要探讨通过生物技术重组纯化的骨形态发生蛋白9(BMP-9)的体外诱导成骨活性.用PCR技术扩增人骨形态发生蛋白9(hBMP-9)全长序列,构建真核表达载体pcDNA4/His·Max-hBMP-9,与质粒pSV2-dhfr共同转染CHO-dhfr-细胞,用含有100μg/mL博来霉素的IMDM进行筛选和MTX系统扩大目的基因的整合,从而获得高表达重组人骨形态发生蛋白9(rhBMP-9)的抗性单克隆株.收集高表达蛋白的单克隆株培养基上清,经His标签的蛋白纯化柱纯化,Western blot和SDS-PAGE检测显示有分子量分别约32 kD和50 kD的条带.用浓度分别为20、50和100 μg/mL的rhBMP-9刺激培养C3H10 T1/2,培养7d和20 d后分别检测碱性磷酸酶和骨钙素、骨桥蛋白的表达.各项早晚期成骨指标显示,rhBMP-9具有较强的体外诱导成骨能力,且与浓度成正相关.本研究表明,通过生物医学技术构建的rhBMP-9具有较强的骨诱导性,为进一步体内试验以及临床应用奠定了基础.
关键词： 重组人骨形态发生蛋白9 真核体系 蛋白纯化 骨诱导
