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人β-防御素-2 COS-7细胞 基因重组 基因转染文献资料
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C端带Myc和多聚组氨酸双标记的重组人β-防御素-2在COS-7细胞的转染表达
本研究旨在探索建立能有效表达和分泌人类β-防御素-2 (hBD-2),其表达产物又易于被检测和分离纯化的哺乳类动物细胞表达系统的可能性及技术路线.将hBD-2的全长cDNA片段插入编码双重报告基因Myc和6 个多聚组氨酸(His)的真核表达质粒pcDNA3.1/Myc-His(+),构建出C端带Myc和6×His的rpcDNA3.1/Myc-His(+)/hBD-2.用脂质体转染法将此重组真核表达载体导入COS-7细胞,分别从mRNA和蛋白质水平分析hBD-2的表达情况并同步检测细胞可溶性蛋白及培养上清的抗菌活性.采用RT-PCR法从被转染的细胞中扩增出一条约240 bp的片段,其大小与预测相符.采用Western blot 法, 用抗His抗体检测到细胞可溶性蛋白在约10 Kd 处有强反应条带显示,其大小与该重组质粒结构中由pCMV启动子驱动的基因片段有可能表达成肽链的分子量(10.1)相符. 双层肉汤琼脂平板扩散法结果显示:分别与正常细胞可溶性蛋白和培养上清比较,转染重组质粒的COS-7细胞的可溶性蛋白及培养上清在金黄色葡萄球菌的平板上均形成明显抑菌环.这些结果提示:所建立的hBD-2哺乳类动物细胞表达系统能有效表达和分泌活性hBD-2.
