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荧光免疫细胞化学法文献资料
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基因重组免疫毒素白细胞介素18-PE38融合基因治疗类风湿性关节炎的初步研究
目的构建白细胞介素18(interleukin18,IL-18)-PE38融合基因的真核表达载体,并研究其在小鼠软骨细胞及3T3细胞中的表达,探讨类风湿性关节炎的基因治疗方法. 方法经限制性内切酶双酶切从质粒PRKL459K-IL18-PE38中获取IL-18-PE38融合基因, 将其与真核表达载体PsecTag2B连接,转化感受态菌,挑取单克隆培养并提取质粒,EcoRⅠ单酶切鉴定.脂质体转染法将构建的真核表达载体转染入3T3细胞及小鼠软骨细胞中,分别设置空载体对照,通过荧光免疫细胞化学法鉴定转染后瞬时表达情况. 结果 EcoRⅠ单酶切后电泳鉴定显示,所构建的真核表达载体PsecTag2B-IL-18-PE38片段长度约为6 000 bp.荧光免疫细胞化学法、荧光显微镜摄片均显示转染融合基因组荧光表达强,空载体对照组荧光表达微弱. 结论 IL-18-PE38融合基因真核表达载体构建成功,并在小鼠软骨细胞及3T3细胞中表达,为类风湿性关节炎的基因治疗研究奠定基础.
