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人尿液干细胞联合硫酸软骨素酶ABC对脊髓损伤后神经生长因子和脑源性神经营养因子表达的影响
目的 探讨大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后,行人尿液干细胞(human urine-derived stem cells,hUSCs)移植以及联合硫酸软骨素酶ABC (chondroitinase ABC,chABC)鞘内注射,对脊髓组织神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的影响,以及其相关分子机制.方法 取人尿液分离培养hUSCs并鉴定.利用Allen法建立大鼠SCI模型;将60只大鼠随机分为5组(n=12),分别为假手术组(A组)、SCI组(B组)、SCI+hUSCs组(C组)、SCI+chABC组(D组)、SCI+hUSCs+chABC组(E组).模型制备后10、20、30 d,利用BBB评分法评价大鼠下肢运动功能;30 d时取脊髓组织,采用实时荧光定量PCR检测及免疫组织化学染色观察NGF、BDNF表达情况,Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达.结果 经鉴定,培养的细胞具有多向分化特性,为hUSCs.SCI模型制备后10、20、30 d,B组下肢运动功能BBB评分均显著低于A、C、D、E组,C、D、E组显著低于A组,C、D组低于E组,比较差异均有统计学意义(P＜0.05).实时荧光定量PCR及免疫组织化学染色检测示,模型制备后30d,B组NGF、BDNF表达显著低于A、C、D、E组,C、D、E组显著低于A组,C、D组低于E组,比较差异均有统计学意义(P＜0.05);C、D组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).Western blot检测显示,B组Bax蛋白相对表达量明显高于A、C、D、E组,C、D、E组显著高于A组,C、D组高于E组,比较差异均有统计学意义(P＜0.05);B组Bcl-2蛋白相对表达量显著低于A、C、D、E组,C、D、E组显著低于A组,C、D组低于E组,比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 hUSCs对大鼠SCI具有修复作用,通过联合chABC可促进SCI修复,其机制可能是通过促进NGF和BDNF表达,抑制神经细胞凋亡,发挥保护作用.
